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2018年检验主管技师考试备考资料(十)
静脉采血法
采血部位：肘静脉;手背部手腕部等体表静脉;幼儿可采用颈外静脉采血。
采血器材：一次性注射器，真空定量采血装置
注意事项：
(1)防止溶血：造成溶血的因素有注射器和容器不干燥、不清洁;淤血时间过长;穿刺不顺利，组织损伤过多;抽血速度太快;血液注入容器时未取下针头或注入速度过快产生大量泡沫;震荡过于剧烈等。若用普通注射器采血后，未取针头直接将血注入真空管内，也易造成溶血。体内溶血属合格标本，但应在报告单上注明。
(2)避免充血和血液浓缩：采血时应动作迅速，尽可能缩短止血带使用时间。用止血带压迫时间最好不超过半分钟，否则将使生化结果升高或下降。
(3)若病人正在进行静脉输液，不宜在输液同侧手臂采血;若女性病人做了乳腺切除术，应在手术对侧手臂采血。
(4)采血的体位：体位改变可引起一系列的生理变化，使血液中的许多指标发生改变。一般采取直立位采血，其二标本的测定值比卧位高5%～15%.因此，采血时要注意保持正确的体位(坐位或卧位)，以及体位的一致性。
(5)采血时只能向外抽，决不能向静脉内推，以免注入空气，形成气栓而造成严重后果。
(6)很多生化成分受膳食影响，因此，采血前要确认病人是否空腹。
(7)采血过程中晕厥：拔出针头，嘱其平卧，必要时可给患者嗅芳香氨酊、针刺(或拇指压掐)人中、合谷，静点葡萄糖或口服糖水。
结核分枝杆菌的两种变异性
结核分枝杆菌的形态、菌落、毒力及耐药性等均可发生变异。
(1)耐药性变异：结核分枝杆菌对抗结核药物较易产生耐药性，造成耐药菌株增多，给治疗造成困难。
(2)毒力变异：将有毒的牛分枝杆菌培养于含甘油、胆汁、马铃薯的培养基中，经230次移种传代，历时13年而获得了减毒活菌株，即卡介苗，目前广泛用于人类结核病的预防。
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微生物基本知识汇总
一、微生物的概念
微生物是广泛存在于自然界的形体微小、数量繁多、肉眼看不见，需借助于光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、上千倍才能观察到的低等生物体。
二、微生物的分类及作用
微生物的种类及其特点微生物种类繁多，按其大小、结构、组成等可分为3大类：
(1)非细胞型微生物为形体最小，以纳米(nm)为测量单位，结构最为简单，仅含有一种核酸RNA或DNA，或仅为传染性蛋白粒子，具有超级寄生性，仅在活的易感细胞中才能复制，且易变异的最低等生物体，包括病毒、朊病毒等。
(2)原核细胞型微生物为单细胞微生物，大小以微米(μm)计，其细胞分化不完善，无完整细胞核及核膜、核仁，拟核或称核质由胞质内聚积的双链螺旋结构DNA和RNA构成，胞质内有核蛋白体，但缺少内质网，线粒体等细胞器。此类微生物包括细菌，支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌等6类。
(3)真核细胞型微生物为多细胞或单细胞微生物(真菌)，其细胞分化完善有细胞核和各种细胞器，故易在体外生长繁殖。
三、微生物与人类的关系
1、人类与微生物和平共处，相互制药，相互依存，处于一种动态平衡状态。
2、微生物对人类的益处。
3、微生物对人类的害处。
4、全力以赴维持人体与微生物之间的生态平衡。
四、微生物学、微生物医学的概念
1、微生物学的概念：
微生物学是高等院校生物类专业必开的一门重要基础课或专业基础课，也是现代高新生物技术的理论与技术基础。基因工程、细胞工程、酶工程及发酵工程就是在微生物学原理与技术基础上形成和发展起来的;微生物学也是高等农林院校生物类专业发展及农林业现代化的重要基石之一。随着生物技术广泛应用，微生物学对现代与未来人类的 生产活动及生活必将产生巨大影响。
2、医学微生物学的概念
医学微生物学为主要研究与人类医学有关的病原微生物的生物学性状、医学教育|网搜集对人体的感染和致病机制、特异性诊断方法以及预防和治疗感染性疾病(简称感染病)的措施，以控制甚至于消灭人类感染病为宗旨的一门科学，目前还扩展研究对人类健康有益的微生物。
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胃原性腹泻化验方法
若怀疑为胃原性腹泻，应进行胃液分析，以了解胃酸的分泌情况。胃液分析主要包括三方面内容，即一般性状检查、化学检查和显微镜检查，其中化学检查尤其是酸度检查更为重要。晨起空腹时插入胃管，抽出全部空腹胃液，然后经胃管注入试验餐，此后每隔15分钟抽取胃液10ml，注入编好序号的试管内，由抽空腹胃液至标本采集完毕，共2个小时。
一般性状检查 ：
①量：正常空腹胃液量约为10～100ml.胃液分泌过多，见于十二指肠溃疡、胃泌素瘤或排空困难时(如幽门梗阻);胃液分泌过少，见于胃蠕动亢进。
②色：正常胃液无色，如含有相当量的唾液及粘液时，则呈稍混浊的灰白色;有胆汁反流时，呈黄色或草绿色;如为咖啡色，则表示血液在胃内贮留时间较长，见于胃溃疡和十二指肠溃疡合并出皿。
③气味：正常胃液有轻度酸味，无特殊臭味。胃液潴留时有****气味，晚期胃癌时有恶臭味。
④食物残渣：正常空腹胃液中应无食物残渣，幽门梗阻时可见隔宿的食物残渣。
化学检查：
①游离酸和总酸度检查：游离酸即盐酸，结合酸指与蛋白质疏松结合的盐酸，总酸则包括游离酸、结合酸和来自食物或细菌代谢产生的有机酸，如乳酸、醋酸和酸式磷酸盐。正常空腹胃液游离酸含量约为10～30u，总酸度约为10～50u;注入试验餐后1小时，胃液游离酸可上升至 25～50u，胃液总酸度为50～100u;如注射组织胺约20分钟后，游离酸可达最高峰，总酸度可达150u.十二指肠溃疡病人的胃液酸度可明显增高，胃溃疡患者亦可轻度增高或正常;萎缩性胃炎、胃癌患者的胃液酸度则明显降低或缺乏。
恶性贫血病人经组织胺刺激后仍无游离酸分泌，称为真性胃酸缺乏症。
②乳酸定性检查：正常胃液内可有少量乳酸，因受强酸抑制，一般定性检查为阴性。当胃酸缺乏或有食物潴留时，因潴留食物经细菌分解后产生较多乳酸，定性试验可呈阳性。胃癌病人除胃酸缺乏及潴留食物发酵外，癌组织在代谢过程中可分解葡萄糖为乳酸，故乳酸检查常呈强阳性反应。
显微镜检查：由于内窥镜检查的广泛应用，胃液的显微镜检查已很少进行。为协助诊断胃癌，有时可采用胃灌洗液沉淀法查找癌细胞。
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球菌的生物学形态
多数球菌直径为1μm左右，呈球形或近似球形(豆形、肾形、矛头型等)。根据球菌繁殖时分裂平面不同和分裂后菌体间相互粘附程度及排列方式不同，可分为：
①双球菌：在一个平面上分裂后两个菌体成双排列，如脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌;
②链球菌：在一个平面上分裂后多个菌体粘连成链状，如溶血性链球菌;
③葡萄球菌：在多个不规则的平面上分裂，分裂后菌体粘附在一起呈葡萄串状，如金黄色葡萄球菌;
此外还有在两个相互垂直的平面上分裂为四个菌体排列成正方形的四联球菌。在三个相互垂直平面上分裂成八个菌体排列在一起的八叠球菌。
寄生虫寄生环境
体内寄生生物(endoparasite)，一切寄生在寄主体内的寄生生物。例如寄生在人类消化道，肺，肝，血液管道。甚至是脑组织和眼球。体内寄生虫又分为：
①消化道内寄生虫，如蛔虫、钩虫、绦虫、溶组织内阿米巴和雅尔氏(旧译蓝氏贾第)鞭毛虫等;
②腔道内寄生虫，如阴道毛滴虫;
③肝内寄生虫，如肝吸虫、棘球蚴(包虫);
④肺内寄生虫，如卫斯特曼氏并殖吸虫(简称卫氏并殖吸虫);
⑤脑组织寄生虫，如猪囊尾蚴(猪囊虫)、弓形虫;
⑥血管内寄生虫，如血吸虫;
⑦淋巴管内寄生虫，如丝虫;
⑧肌肉组织寄生虫，如旋毛虫幼虫;
⑨细胞内寄生虫，如疟原虫(红细胞内寄生)和利什曼氏原虫(巨噬细胞内寄生);
⑩骨组织寄生虫，如包虫;皮肤寄生虫，如疥螨、毛囊螨;眼内寄生虫，如吸吮线虫、猪囊虫等等。
体外寄生生物(ectoparasite)，一切寄生在寄主体外的寄生生物，例如人体表寄生虫寄生在人类纺织物和皮肤之间寄生，甚至是在人的皮肤底下，鼻孔，****等腔道;畜禽体表寄生虫寄生在畜禽体表被毛下，如目前常见的寄生在种鸡、蛋鸡羽毛下的虱子、螨虫，严重的影响到寄主的生产、发育。
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铁代谢的检验
1.血清铁测定
(1)原理：血清铁以Fe3+形式与转铁蛋白(Tf)结合存在，降低介质pH及加入还原剂(如抗坏血酸、羟胺盐酸盐等)能将Fe3+还原为Fe2+，则转铁蛋白对铁离子的亲和力降低而解离，解离出的Fe2+与显色剂(如菲咯嗪和2，2′-联呲啶等)反应，生成有色络合物，同时作标准对照，计算出血清铁的含量。
参考值：成年男性11.6～31.3μmol/L，女性9.0～30.4μmol/L.
(2)临床意义：血清铁降低见于缺铁性贫血、失血、营养缺乏，感染和慢性病。增高见于肝脏疾病、造血不良、无效性增生、慢性溶血、反复输血和铁负荷过重。
2.血清铁蛋白测定
(1)原理：常采用固相放射免疫法，先用兔抗人脾铁蛋白与铁蛋白相结合，再用125I标记兔抗人脾铁蛋白与固相上结合的铁蛋白相结合，除去未结合的过多的放免标记物，洗脱结合放免标记的铁蛋白，用γ计数器与标准曲线比较，计算出铁蛋白值。
参考值：成人男性15～200μg/L，女性12～150μg/L，小儿低于成人;青春期至中年，男性高于女性。
(2)临床意义：降低见于缺铁性贫血早期、失血、营养缺乏和慢性贫血等。增高见于肝脏疾病、血色病、急性感染和恶性肿瘤。
3.血清总铁结合力测定
(1)原理：血清总铁结合力(TIBC)通常情况下，仅有1/3的运铁蛋白与铁结合。在血清中加入已知过量的铁标准液，使血清中全部的Tf与铁结合达到饱和状态，再用吸附剂(轻质碳酸镁)除去多余的铁。再按上法测定血清铁含量，其结果为总铁结合力，如再减去先测的血清铁，则为未饱和铁结合力(UIBC)。
参考值：TIBC：男性50～77μmol/L，女性54～77μmol/L
UIBC：25.1～51.9μmol/L.
(2)临床意义：增高见于缺铁性贫血、红细胞增多症。降低或正常见于肝脏疾病、恶性肿瘤、感染性贫血、血色病和溶血性贫血，显著降低者见于肾病综合征。
4.转铁蛋白饱和度测定
转铁蛋白饱和度(TS)(%)=血清铁/总铁结合力×100
(1)参考值：20%～55%(均值男性34%，女性33%)。
(2)临床意义：降低见于缺铁性贫血(TS小于l5%)，炎症等。增高见于铁利用障碍，如铁粒幼细胞贫血、再障;铁负荷过重，如血色病早期，贮存铁增加不显著，但血清铁已增加，TS大于70%，这是诊断的可靠指标。
5.转铁蛋白测定
(1)原理：免疫散射比浊法：利用抗人转铁蛋白血清与待检测的转铁蛋白结合形成抗原抗体复合物，其光吸收和散射浊度增加，与标准曲线比较，可计算出转铁蛋白含量。目前还有放射免疫法和电泳免疫扩散法。
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血红蛋白尿测定
(1)原理：血管内有大量红细胞破坏，血浆中的游离血红蛋白超过1000mg/L时，血红蛋白可随尿排出，尿中血红蛋白检查阳性。其特点为外观呈浓茶色或透明的酱油色，镜检无红细胞，但隐血试验呈阳性反应。
结果：尿隐血试验阴性。
(2)临床意义：血型不合的输血、大面积烧伤、恶性疟疾、某些传染病、溶血性中毒症等明显增多。遗传性或继发性溶血性贫血，如蚕豆病、阵发性寒冷性血红蛋白尿症，行军性血红蛋白尿及阵发性睡眠性血红蛋白尿症等(血管内溶血阳性)。
时间分辨信号原理
普通物质荧光光谱分为激发光谱和发射光谱，在选择荧光物质作为标记物时，必须考虑激发光谱和发射光谱之间的波长差，即Stakes位移的大小。如果Stakes位移小，激发光谱和发射光谱常有重叠，相互干扰，影响检测结果的准确性。镧系元素的荧光光谱有较大的Stakes位移，最大可达290nm，激发光谱和发射光谱间不会相互重叠，加上其发射的光谱信号峰很窄，荧光寿命长，铕的荧光寿命可达730us，检测中只要在每个激发光脉冲过后采用延缓测量时间的方式，待短寿命的背景荧光衰变消失后，再打开取样门仪器记录长寿命铕鳌合物发射的特异性荧光，可以避免本底荧光干扰，提高检测的精密度。
TRFIA的测量仪器是时间分辨荧光计，由三大部分组成：光源：脉冲光源：氙灯(每秒闪烁1000次);小型N2激光器;输出脉冲波长：337nm荧光信号获取系统;数据处理系统。
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正常浆细胞的形态：
浆细胞(plasmacyte)细胞直径8～15μm，细胞椭圆形或不规则形，胞质丰富，呈深蓝或紫蓝色，不透明，有泡沫感，核周有明显淡染区，浆中常有小空泡，胞质边缘多不规则，可有刺状突出，胞质常呈飘扬的旗帜样，少数嗜天青颗粒，胞核较小，占细胞1/3左右，圆或椭圆形，偏位，无核仁，染色质粗密，凝成大块，常呈车辐状排列。正常血液不见、骨髓中可见。
生化全项的概念
生化全项，是医院检验科的常见的血液检验化验项目，就字面来讲应该包罗万象，但并非如此，主要指的是肝功、肾功和血液电解质，血糖和血脂等。血液方面化验很多，这些是重要的、常用的，但不是全部。www.ExamW.CoM
生物化学一般简称“生化”，也就是生化项目，是医学检验的一个主要分支学科检验大项，可以有几百甚至上千种生化项目，并随着医学发展不断丰富更新。
临床上，为了方便，往往以“生化全项”的称呼来概括常用的生化项目，既方便医生开具检验申请单，也利于患者了解。
不过，不同的医院可能对本单位的“生化全项”有不同的定义，在某些项目上可以有少许差别。
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纯淋巴细胞群的采集
通常利用单核细胞在37℃和Ca2+存在条件下，能主动粘附在玻璃、塑料、尼龙毛、棉花纤维或葡聚糖凝胶的特性，据此建立许多从单个核细胞悬液中去除单核细胞的方法，藉以获得高纯度的淋巴细胞群。
(一)粘附贴壁法
将已制备的单个核细胞悬液倾于玻璃或塑料平皿或扁平小瓶中，移至37℃温箱静置1h左右，单核细胞和粒细胞均贴于平皿壁上，而未贴壁的非粘附细胞几乎为纯淋巴细胞，继用橡皮刮下贴壁的细胞即为纯单核细胞群。因B细胞也有贴壁现象，用本法分离的淋巴细胞群中B细胞有所损失。
(二)吸附柱过滤法
将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶SephadexG10的柱层中，凡有粘附能力的细胞绝大部分被吸附而粘滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。此法简单易行，对细胞极少损害。
(三)磁铁吸引法
利用单核细胞具有吞噬的特性，在单个核细胞悬液中加直径为3μm的羰基铁颗粒，置37℃温箱内短时旋转摇动，待单核细胞充分吞噬羰基铁颗粒后，用磁铁将细胞吸至管底，上层液中含较纯的淋巴细胞。
含铁血黄素尿检查
含铁血黄素尿为尿中含有暗黄色不稳定的铁蛋白聚合体，是含铁的棕色色素。血管内溶血时肾脏在清除游离血红蛋白过程中，血红蛋白大部分随尿排出，产生血红蛋白尿。其中的一部分血红蛋白被肾小管上皮细胞重吸收，并在细胞内分解成含铁血黄素，当这些细胞脱落至尿中时，可用铁染色法检出，细胞解体时，则含铁血黄素颗粒释放于尿中，也可用Prussian蓝反应予以鉴别。
参考值
含铁血黄素定性试验：阴性(普鲁士蓝法)
临床意义
尿内含铁血红素检查，对诊断慢性血管内溶血有一定价值，主要见于阵发性睡眠性血红蛋白尿症、行军性肌红蛋白尿、自身免疫溶血性贫血、严重肌肉疾病等。但急性溶血初期，血红蛋白检查阳性，因血红蛋白尚未被肾上皮细胞摄取，未形成含铁血黄素，本试验可呈阴性。
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免疫应答三个过程
1.抗原识别阶段此阶段可包括抗原的摄取、处理和加工，抗原的呈递和对抗原的识别，分别由Mφ、T和B细胞完成。
2.免疫细胞的活化和分化阶段此阶段可包括抗原识别细胞膜受体的交联、膜信号产生与传递、细胞增殖与分化以及生物活性介质的合成与释放，主要由T和B细胞完成。
3.免疫应答的效应阶段此阶段主要包括效应分子(体液免疫)和效应细胞(细胞免疫)对非已细胞或分子的清除作用，即所谓排异效应，及其对免疫应答的调节作用。此阶段除抗体和效应T细胞参予外，即非特异免疫细胞和分子参加才能完成排异和免疫调节作用。
T细胞的抗原受体
成熟T细胞表面具有特异性识别抗原并与之结合的分子结构，称为T细胞抗原受体。TCR是一种双肽链分子，按肽链编码基因不同可分为两类：
1、在外周淋巴器官中大多数成熟T细胞(95%)的TCR分子，由α链和β链经二硫键连接的异二聚体分子，也称TCR-2.T细胞特异性免疫应答主要是这一类T细胞完成。
2、少数成熟T细胞的TCR分子是由γ链和δ链组成的异二聚体分子，结构与TCRαβ相似，也称TCR-1.它可直接识别抗原(多肽、类脂分子)，不必与MHC结合，也不需要抗原提呈分子。
TCRγδ主要存在于小肠粘膜上皮和表皮，而外周血中仅占成熟T细胞的0.5%—10%.TCRγδ识别病原体表面抗原分子后，增殖分化为效应细胞发挥杀伤作用，同时他对被病毒感染的细胞和肿瘤细胞具有杀伤活性。
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植物血凝素皮肤试验
【参考范围】
24～48h内观察结果：红斑直径≥15mm为阳性反应，正常人为阳性。
【影响因素】
抗原的纯度和剂量对试验有很大影响，应用较纯的制品，选择适当的试验浓度;此外要正确进行皮肤试验的常规技术操作。
【临床意义】
PHA是从扁豆中提取的一种非特异性促有丝分裂原，不仅在体外能够使人或动物成熟T淋巴细胞转化为淋巴母细胞，而且皮内注射24h后，也可引起红润与硬结。
病理表现与OT及SK-SD反应相似，即以单核细胞浸润为主的炎性反应(迟发型变态反应)。
PHA皮试反应温和，对人体无明显毒性，是一种较好且安全的细胞免疫功能体内检测指标，临床上还可用于检查外周血T细胞的免疫功能。
PHA皮试阳性表示T细胞免疫功能正常;恶性肿瘤、白血病、自身免疫性疾病、病毒感染、结缔组织病、粟粒性结核、应用免疫抑制剂等反应降低或阴性，70岁以上老年人PHA皮试也降低。若为阴性或降低，应进一步采用其他方法检测证实。
免疫细胞
免疫细胞(immune cell)是白细胞的俗称，包括淋巴细胞和各种吞噬细胞等，也特指能识别抗原、产生特异性免疫应答的淋巴细胞等。淋巴细胞是免疫系统的基本成分，在体内分布很广泛，主要是T淋巴细胞、B淋巴细胞受抗原刺激而被活化(activation)，分裂增殖、发生特异性免疫应答。除T淋巴细胞和B淋巴细胞外，还有 K淋巴细胞和NK淋巴细胞，共四种类型。
T淋巴细胞是一个多功能的细胞群。除淋巴细胞外，参与免疫应答的细胞还有浆细胞、粒细胞、肥大细胞、抗原呈递细胞及单核吞噬细胞系统的细胞。
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